Современные методы диагностики заболеваний дыхательной системы

свиней

Прилепко Евгения Александровна

ОГАПОУ «Бирючанский техникум»,

город Бирюч, Белгородской области

Научный руководитель: Прилепко Л.П.

В условиях большинства свиноводческих ферм на долю болезней

органов дыхания приходится в среднем 20—30% от всех случаев незаразных

болезней. Статистический анализ свидетельствует, что в промышленных

животноводческих

комплексах

по

откорму

и

выращиванию

свиней

параллельно с концентрацией животных удельный вес болезней органов

дыхания в сравнении с другими незаразными болезнями продолжает расти,

что обусловлено международным оборотом животных и, соответственно,

появлению новых, быстро распространяющихся болезней.

Цель работы

заключалась в выборе методов диагностики

репродуктивно-респираторного

синдрома

свиней

(РРСС)

в

условиях

производства.

Задачи исследования: 1. Выявить возбудителя репродуктивно-

респираторного

синдрома

свиней

у

свинопоголовья

участка

с

использованием экспресс-методов.

Предмет исследования. Применение в производственных условиях

тест-систем по исследованию сыворотки крови свиней по выявлению

репродуктивно-респираторного синдрома.

Гипотеза исследования состоит в том, что использование тест-систем

для выявления вируса РРСС, позволит проводить дифференциальную

диагностику

репродуктивно

-

респираторного

синдрома

от

сходных

заболеваний у свиней.

Работа выполнена в свиноводческом хозяйстве, на участке

воспроизводства.

При осмотре животных было выявлено увеличение количества абортов

или ранних опоросов, снижение количества поросят в опоросе, повышение

смертности до отъема, снижение рождаемости и увеличение количества

прохолостов

у

свиноматок,

в

том

числе

задержка

охоты

-

это

свидетельствует,

в

том

числе,

о

наличии

вируса

репродуктивно-

респираторного синдрома свиней (РРСС) в стаде.

Проведена лабораторная диагностика обнаружение антител в слюне

методом

твердофазного

иммуноферментного

анализа

(ELISA).

Обнаружение антител в слюне животных методом ИФА (ELISA)

позволило исследовать большее количество животных на наличие РРСС с

относительно небольшими финансовыми затратами.

Техника проведения заключалась в следующем: Для отбора проб

использовали

веревку

из

натурального

волокна

(100

%

хлопок)

диаметром 0,6 - 1,2 см, новый полиэтиленовый пакет, пластиковые

пробирки «Эппендорф». Количество проб определили числом станков или

клеток, в которых содержатся животные. В среднем для отбора слюны

использовалась 1 веревка на 20-30 животных. Отбор образцов проводили

утром до кормления, т.к. в это время животные более охотно жуют веревки.

Повесили веревку в станке с животными возле кормушки или поилки на

уровне пятачка и оставили на 20-30 минут. После того, как свиньи пожевали

веревку (25-30 минут) и в ней накопилось достаточное количество слюны,

сняли ее. Положили ее в полиэтиленовый пакет и хорошо выкрутили,

жидкость собралась на дне пакета. Аккуратно срезали уголок пакета, а

жидкость слили в пробирку. Образцы пронумеровали, и отправили в

лабораторию вместе

с

сопроводительными

документами.

Нельзя

объединять образцы с разных веревок.

Полученные образцы слюны можно использовать как для определения

наличия антител с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), так и

для быстрого определения наличия уникальной последовательности генома

вируса методом ПЦР.

Интерпритация. Если после проведения комплекса исследований ИФА

и ПЦР в слюне животных вы получили такие результаты:

• ПЦР – положительный, ИФА – положительный: животные инфицированы,

ситуацию

нужно

стабилизировать

путем исключения

животных-

вирусоносителей (так как ранее провели тестирование слюны животных

пулом

(1

проба=30 животных) необходимо провести исследование

сыворотки крови методом ИФА на наличие титров антител к РРСС и

методом ПЦР на наличие вируса индивидуально у каждого животного);

• ПЦР – отрицательный, ИФА – отрицательный: животные свободны от

вируса РРСС, ситуация стабильная в случае отсутствия вакцинации в стаде

(если в стаде проводилась вакцинация, а иммунного ответа нет – нужно

обратить внимание на технику вакцинации, условия хранения вакцины,

иммунный статус животных на момент проведения вакцинации или учесть

другие возможные причины);

• ПЦР

–

положительный,

ИФА

–

отрицательный:

животные

инфицированы, вирус выделяется в окружающую среду, иммунной

защиты нет или иммунный ответ еще не сформировался (прошло менее 7-14

дней после инфицирования).

• ПЦР – отрицательный, ИФА – положительный: животные имели контакт

с

антигеном,

сформировался

иммунный фон стада –защита есть,

вирусовыделения нет.

По результатам проведенного исследования ПЦР – отрицательный,

ИФА – положительный: животные имели

контакт

с

антигеном,

сформировался иммунный фон стада –защита есть, вирусовыделения нет.

Выбор диагностических инструментов зависит от цели исследований:

мониторинг,

скрининг,

контроль

вакцинации

и др. Универсального

способа диагностики РРСС не существует – нужен комплексный подход, при

котором необходимо учитывать

специфическую ситуацию

в

каждом

отдельном хозяйстве, в следствие которых могут изменяться параметры и

2

подходы к исследованиям.

В стадах положительных по РРСС, которые применяют вакцинацию

животных живыми или инактивированными вакцинами

рекомендуется

отбирать пробы слюны для ИФА от супоросных свиноматок и хряков, а

также проводить комплексную диагностику ИФА и ПЦР ремонтных

животных, поросят на подсосе, доращивании и откорме. Дополнительно

следует проводить ПЦР исследование абортплодов и спермы от хряков. В

стадах с положительным статусом по РРСС, и в которых не применяют

вакцинацию, следует использовать комбинацию методов ИФА и ПЦР для

диагностики всех групп животных, а также абортплодов. Особенность

полимеразной

цепной

реакции

в реальном

времени

–

возможность

регистрации результата ПЦР в процессе реакции, в каждый момент времени.

Для

ПЦР используют

одну

пару

универсальных

праймеров,

общих

для американского

и европейского

типа

вирусов.

Дифференциация

проводится с помощью молекулярных зондов (коротких одноцепочечных

фрагментов

ДНК размером

21

и 27

нуклеотидов,

синтезированных

химическим путем), комплементарных внутренним участкам – фрагментам

РНК вируса

репродуктивно-респираторного

синдрома

свиней(американскому и европейскому штаммам).

Тест-система для обнаружения вируса репродуктивного и

респираторного синдрома свиней (РРСС) методом полимеразной цепной

реакции (ПЦР).

С помощью данной тест-системы вирус репродуктивно-

респираторного

синдрома

свиней (РРСС)

может

быть

обнаружен

в патматериале

от больных (кровь,

сыворотка,

сперма,

носовые

и конъюнктивальные

смывы)

и павших (органы)

животных,

а также

в инфицированных культурах клеток. Тест-система позволяет определять

вирус в концентрации 10-100 ИД

50

/мл.

Анализ по выявлению вируса РРСС включает выделение суммарной

РНК, совмещенную реакцию обратной транскрипции и амплификации (ОТ-

ПЦР), реамплификацию и электрофорез в агарозном геле.

Тест-система

рассчитана

на проведение

50

анализов.

Время проведения анализа – от 8 до 24 часов (в зависимости от количества

проб и используемого оборудования).

Принцип действия:

Обнаружение вируса РРСС проводится

с использованием ОТ-ПЦР. В результате реакции РНК преобразуется в кДНК

и затем

амплифицируется.

При этом

концентрация

синтезированного

фрагмента

в исследуемой

пробе

увеличивается

в миллионы

раз,

что позволяет учитывать результаты анализа с помощью электрофореза

в агарозном геле.

Тест-система является универсальной и позволяет выявлять

как американский, так и европейский типы вируса РРСС. Тест-система также

дифференцирует вирус РРСС от других родственных вирусов.

Схема диагностики В негативных стадах или стадах с неизвестным

статусом рекомендуется отбирать пробы слюны от супоросных свиноматок,

хряков,

ремонтного

молодняка

и

животных

на

откорме

на

ИФА

3

исследования, а также от карантинируемых ремонтных свинок и хрячков на

ПЦР. В стадах положительных по РРСС, которые применяют вакцинацию

животных живыми или инактивированными вакцинами рекомендуется

отбирать пробы слюны для ИФА от супоросных свиноматок и хряков, а

также проводить комплексную диагностику ИФА и ПЦР ремонтных

животных, поросят на подсосе, доращивании и откорме. Дополнительно

следует проводить ПЦР исследование абортплодов и спермы от хряков. В

стадах с положительным статусом по РРСС, и в которых не применяют

вакцинацию, следует использовать комбинацию методов ИФА и ПЦР для

диагностики всех групп животных, а также абортплодов. Интерпритация

Если после проведения комплекса исследований ИФА и ПЦР в слюне

животных вы получили такие результаты: • ПЦР – положительный, ИФА –

положительный:

животные

инфицированы,

ситуацию

нужно

стабилизировать путем исключения животных-вирусоносителей (так как

ранее провели тестирование слюны животных пулом (1 про- ба=30

животных) необходимо провести исследование сы- воротки крови методом

ИФА на наличие титров антител к РРСС и методом ПЦР на наличие вируса

индивидуально у каждого животного); • ПЦР – отрицательный, ИФА –

отрицательный: животные свободны от вируса РРСС, ситуация стабильная в

случае отсутствия вакцинации в стаде (если в стаде проводилась вакцинация,

а иммунного ответа нет – нужно обратить внимание на технику вакцинации,

условия хранения вак- цины, иммунный статус животных на момент

проведения вакцинации или учесть другие возможные причины); • ПЦР –

положительный, ИФА – отрицательный: животные инфицированы, вирус

выделяется в окружающую среду, иммунной защиты нет или иммунный

ответ

еще

не

сформи-

ровался

(прошло

менее

7-14

дней

после

инфицирования). • ПЦР – отрицательный, ИФА – положительный: животные

имели контакт с антигеном, сформировался иммунный фон стада –защита

есть, вирусовыделения нет. Выбор диагностических инструментов зависит от

цели исследований: мониторинг, скрининг, контроль вакцинации и др.

Универсального способа диагностики РРСС не существует – нужен

комплексный подход, при котором необходимо учитывать специфическую

ситуацию в каждом отдельном хозяйстве, в следствие которых могут

изменяться параметры и подходы к исследованиям.

Выбор диагностических инструментов зависит от цели исследований:

исследование

животных

на

карантине,

определение

статуса

стада,

распространенности заболевания, скрининг, мониторинг заболеваемости или

контроль вакцинации. Универсального способа диагностики РРСС не

существует – нужен комплексный подход, при котором необходимо

учитывать историю стада и специфическую ситуацию на предприятии, в

следствие которых могут изменяться подходы к исследованиям.

Анализ полученных результатов исследования

Для массовых исследований в условиях производства, в целях ранней

диагностики

репродуктивно-респираторного

синдрома

свиней

(РРСС)

использовались

современные

тест-системы,

для

обнаружения

вируса

4

репродуктивного и респираторного синдрома свиней (РРСС) методом

полимеразной цепной реакции (ПЦР), и тест-система для обнаружения

вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней методом ПЦР в

реальном времени, которые позволяют обнаружить возбудителя РРСС

в патматериале

от больных (кровь,

сыворотка,

сперма,

носовые

и конъюнктивальные

смывы)

и павших (органы)

животных,

а также

в инфицированных

культурах

клеток,

и

дифференцировать

его

от

возбудителей других заболеваний.

Заключение

Выбор диагностических инструментов зависит от цели

исследований: исследование животных на карантине, определение статуса

стада,

распространенности

заболевания,

скрининг,

мониторинг

заболеваемости или контроль вакцинации. Универсального способа

диагностики РРСС не существует – нужен комплексный подход, при

котором необходимо

учитывать

историю

стада

и

специфическую

ситуацию на предприятии, вследствие которых могут изменяться подходы к

исследованиям.

Список использованной литературы

1. Бахтин А.Г. Профилактики и лечебно оздоровительные мероприятия при

заболевании органов дыхания и пищеварения у поросят / А.Г. Бахтин, Г.П.

Королева//Ветеринария. 2016. - №1 - С.46 - 49

12. Емельянов Б. М. Пневмонии свиней / Б.М. Емельянов // Свиноводство.-

2011.- №8. - С. 39

23.

Михайлик

В.А.

Лечение

при

катаральной

пневмонии

сельскохозяйственных животных / В.А. Михайлик // Ветеринария. - 2015. -

№3.- С. 43

5